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凱氏定氮法測(cè)定骨膠原肽中蛋白質(zhì)含量
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儀器與試劑儀器
K1160全自動(dòng)凱氏定氮儀,SH420F石墨消解儀
試劑
硫酸(分析純),硼酸(分析純),氧化鈉(分析純),溴甲酚綠-甲基紅混合指示劑,催化劑片(3g硫酸鉀和0.2g硫酸銅混合均勻壓片),0.1mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定液。
實(shí)驗(yàn)方法取樣
取0.2g左右樣品,加催化劑一片(或硫酸鉀3g與硫酸銅0.2g),再沿瓶壁滴加硫酸10.0ml。
消解
利用石墨消解爐進(jìn)行消解,將消化管放在石墨爐上,蓋上排氣罩,連接廢氣吸收系統(tǒng),消化完畢后,將消化管取下冷卻至室溫。消化過(guò)程采用曲線升溫模式,設(shè)置參數(shù)如下:
溫度(℃) | 時(shí)間(min) | |
1 | 240 | 15 |
2 | 420 | 60 |
上機(jī)測(cè)試
待消化管內(nèi)溶液冷卻至室溫后,將消化管放置于定氮儀上。定氮儀設(shè)置程序如下:
硼酸 | 稀釋水 | 堿液 | 蒸餾量 | 蒸汽流量 |
25ML | 30ML | 35ML | 5min | 99.99% |
實(shí)驗(yàn)結(jié)果儀器自動(dòng)滴定并計(jì)算,計(jì)算公式如下
式中:c-標(biāo)準(zhǔn)酸摩爾濃度(mol/L)
W-樣品質(zhì)量(g)
V0-空白樣滴定標(biāo)準(zhǔn)酸消耗量(mL)
V-樣品滴定標(biāo)準(zhǔn)酸消耗量(mL),準(zhǔn)確到小數(shù)點(diǎn)后四位
編號(hào) | 取樣量(g) | 蛋白質(zhì)含量(%) | 平均值(%) | RSD(%) |
1 | 0.2030 | 98.059 | 98.243 | 0.31 |
2 | 0.2006 | 98.597 | ||
3 | 0.2028 | 98.072 |
結(jié)論通過(guò)數(shù)據(jù)可知,利用全自動(dòng)凱氏定氮法測(cè)定骨膠原肽粉中的蛋白質(zhì)含量平行性良好,且具有操作簡(jiǎn)單,安全性高,節(jié)省人力等優(yōu)點(diǎn)。
參考文獻(xiàn)[1]GB 5009.5-2016 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中蛋白質(zhì)的測(cè)定[S].
注意事項(xiàng)樣品中蛋白含量較高,取樣及消解時(shí)應(yīng)注意減少誤差??梢杂梅Q量紙包裹住樣品投入消化管中,以防止樣品粘在消化管上部。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中濃酸濃堿較為危險(xiǎn),請(qǐng)小心操作。
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